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HRM 技術(shù)是high-resolution melting analysis 即高分辨熔解曲線分析技術(shù)，是近年國外興起的一種全新的突變掃描和基因分型的遺傳分析方法。基于高效穩(wěn)健的PCR 技術(shù)，HRM 不受突變堿基位點(diǎn)與類型局限，無需序列特異性探針，在PCR 結(jié)束后直接運(yùn)行高分辨熔解，即可完成對(duì)樣品突變、單核苷酸多態(tài)性-SNP、甲基化、HLA 配型等的分析。因操作簡便快速，使用成本低，結(jié)果準(zhǔn)確，實(shí)現(xiàn)了真正的閉管操作，HRM 技術(shù)受到普遍關(guān)注。HRM 應(yīng)用1、SNP（單核苷酸多態(tài)性）的篩查。2、基因突變掃描，包括缺失、重復(fù)、點(diǎn)突變。3、新突變的篩查。4、甲基化的篩查。5、遺傳育種中特定突變的篩查、未知突變的發(fā)現(xiàn)。6、HLA 基因組配型、等位基因頻率分析、物種鑒定、品種鑒定、甲基化研究。7、法醫(yī)學(xué)鑒定、親子鑒定。8、動(dòng)植物品質(zhì)相關(guān)多態(tài)性位點(diǎn)的研究等。植物抗逆性，突變與性狀關(guān)聯(lián)性研究。HRM特點(diǎn)1、高通量：1 次可同時(shí)檢測(cè)10-384 樣本，適合大樣本、多SNP、多突變位點(diǎn)及多位點(diǎn)甲基化的掃描。2、高敏度：腫瘤研究中低突變率樣品基因突變檢測(cè)，**檢測(cè)到0.1%的突變樣品基因突變，即檢測(cè)到1000 個(gè)正常細(xì)胞中1 個(gè)突變細(xì)胞，適用于手術(shù)和其它微量組織中突變檢測(cè)。檢測(cè)靈敏性遠(yuǎn)高于“PCR+ 測(cè)序”的25% ，即100 個(gè)正常細(xì)胞中至少有25 個(gè)突變細(xì)胞，測(cè)序僅適用手術(shù)組織。3、特異性好：PCR 產(chǎn)物無需后續(xù)處理，特異性高達(dá)100% 。直接未知雜合突變鑒定準(zhǔn)確性100%，特異性100% 。直接未知純合突變鑒定準(zhǔn)確性96%， 利用非標(biāo)記探針快速基因分型法直接未知純合子鑒定準(zhǔn)確性100%。4、重復(fù)性好：重復(fù)性100%5、使用范圍廣：不受堿基位點(diǎn)局限，除可檢出已知突變外，也能檢測(cè)出未知突變。6、重復(fù)性好：樣品PCR 和HRM 分析直接在同一管內(nèi)進(jìn)行，實(shí)現(xiàn)閉管操作，避免交叉污染。7、操作簡便：只需設(shè)計(jì)特異引物，無需序列特異性探針，無需測(cè)序，也不受突變堿基位點(diǎn)與類型的局限。8、成本低：簡化操作時(shí)間和步驟，大大降低成本，檢測(cè)費(fèi)用遠(yuǎn)少于測(cè)序、Taqman 探針技術(shù)。9、標(biāo)本范圍廣：可用于新鮮或酒精固定、石蠟包埋的手術(shù)標(biāo)本，也可用于微量的穿刺或活檢標(biāo)本、血液標(biāo)本、糞便標(biāo)本等非手術(shù)標(biāo)本的檢測(cè)。傳統(tǒng)“PCR+ 測(cè)序”方法難以檢測(cè)大部分不能手術(shù)的患者。10、其它：只檢測(cè)PCR 樣品中熒光強(qiáng)度的變化，不消耗任何PCR 樣品，無污染，PCR 產(chǎn)物可以進(jìn)行下游分析，非常適合于測(cè)序前的SNP、甲基化等預(yù)掃描篩查。

PCR技術(shù)所謂實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)（real-time PCR，也常被稱為熒光定量PCR，Q-PCR），是指在普通PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，**通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在real-time PCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)和連續(xù)地分析擴(kuò)增相關(guān)的熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)時(shí)間的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)的變化可以繪制成一條曲線。在PCR反應(yīng)早期，產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產(chǎn)生進(jìn)入指數(shù)期、線性期和＊終的平臺(tái)期，因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點(diǎn)上來檢測(cè)PCR產(chǎn)物的量，并且由此來推斷模板＊初的含量。通過對(duì)一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過外標(biāo)法，可對(duì)靶基因進(jìn)行精確的定量分析。實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)自產(chǎn)生以來，不斷發(fā)展完善，到目前為止已經(jīng)非常成熟了。標(biāo)記方法由＊初單一的染料法，發(fā)展到了特異性更高的探針法，因其在原普通PCR的基礎(chǔ)上增加了特異性的結(jié)合探針，通過熒光信號(hào)的檢測(cè)實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)監(jiān)控，不僅提高了檢測(cè)的靈敏度，更增加了PCR反應(yīng)的特異性和準(zhǔn)確性。實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)具有技術(shù)成熟、成本低、準(zhǔn)確率高、重復(fù)性好，檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)，目前，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)已廣泛應(yīng)用于血液篩查、急性流行性傳染病的快速診斷、慢性傳染病的診斷及療效監(jiān)控、個(gè)性化治療的基因診斷、遺傳病診斷、腫瘤個(gè)性化治療和病原體基因分型以及SNP檢測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域，在食品安全、水質(zhì)監(jiān)測(cè)、司法鑒定等方面也得到了＊為廣泛的應(yīng)用。

        DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾，它是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyl-transferase, Dnmt）催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體，將胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基胞嘧啶（mC）的一種反應(yīng)，在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是**存在的化學(xué)性修飾堿基。CG二核苷酸是＊主要的甲基化位點(diǎn)，它在基因組中呈不均勻分布，存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的區(qū)域，在哺乳動(dòng)物中mC約占C總量的2－7％。一般說來，DNA的甲基化會(huì)抑制基因的表達(dá)。DNA的甲基化對(duì)維持染色體的結(jié)構(gòu)、X染色體的失活、基因印記和腫瘤的發(fā)生發(fā)展都起重要的作用。